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化學(xué)發(fā)光試劑都有哪些注意事項
更新時(shí)間：2017-02-08瀏覽：1544次
化學(xué)發(fā)光試劑注意事項,允許步驟2-5在日光燈下進(jìn)行方便操作,但在強光下操作時(shí)間拖得太長(cháng),靈敏度可能會(huì )有一定程度降低,移到暗房操作可避免之.戴手套可以避免在膜上留下手印.長(cháng)時(shí)間曝光或蛋白過(guò)量,將加深背景并使條帶強弱變化失去線(xiàn)性關(guān)系.與工作液孵育1-5分鐘后膜上的條帶發(fā)光.強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見(jiàn),低豐度蛋白條帶可能發(fā)光較弱,但仍可成功進(jìn)行X光膠片曝光.不能簡(jiǎn)單以肉眼觀(guān)察判斷條帶發(fā)光時(shí)間.熒光可持續10小時(shí)以上,條帶弱時(shí)可延長(cháng)曝光至1-10個(gè)小時(shí).
化學(xué)發(fā)光試劑由于超敏發(fā)光液及其靈敏,對大多數來(lái)源的進(jìn)口抗體我們強烈推薦抗體的起始濃度為一抗1:1000，二抗1:2000。通常為一抗1:2000二抗1:4000或更加稀釋。 抗體濃度過(guò)高將造成高背景或沒(méi)有條帶,導致失敗.某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì )淬滅熒光，應選擇高質(zhì)量保鮮膜.使用預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可確定條帶位置和大小.
化學(xué)發(fā)光試劑實(shí)驗前,先將實(shí)驗中所需的所有試劑及待測樣品從冰箱中取出,待溫度與室溫（25℃）平衡1小時(shí)以上后使用.加樣前應將所用試劑和待測樣本分別充分混勻.酶結合物和抗體混勻時(shí),切忌產(chǎn)生大量氣泡.實(shí)驗中用于凍干品復溶和稀釋濃縮洗滌液所用的蒸餾水或去離子水應保證質(zhì)量.凍干品加入蒸餾水或去離子水后,應蓋上膠塞后靜置，待固體物質(zhì)*溶解后，再將試劑瓶反扣在實(shí)驗臺上，讓附著(zhù)在瓶蓋上的固體物質(zhì)溶解，然后充分混勻后待用.
