化學(xué)發(fā)光試劑的配置

.用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙以吸去過(guò)量試劑。置膜片于二層保鮮膜之間，小心趕盡氣泡。將膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。于暗室中壓上X光片。根據信號的強弱適當調整曝光時(shí)間，一般為1min或5min，也可選擇不同時(shí)間多次壓片，以達*效果。顯影沖洗。調節曝光時(shí)間，再次曝光顯影。

    化學(xué)發(fā)光試劑本試劑是非放射性發(fā)光系統，用于檢測固定在膜上的蛋白，其敏感性達1-5pg。用X光片可快速地獲得*的硬拷貝結果。所含*的底物足以維持12小時(shí)以上的發(fā)光，便于反復曝光操作，免疫印跡膜經(jīng)抗體脫卸處理后可供再次抗體探查使用。適用于痕量蛋白或核酸檢測。

  化學(xué)發(fā)光試劑原理：辣根過(guò)氧化酶使試劑中的發(fā)光物（Luminol）氧化并發(fā)光，而試劑中含有增強劑這使得發(fā)光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復雜的蛋白混合物經(jīng)SDS-PAGE分離，并轉移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫學(xué)檢測，經(jīng)HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應。當加入免疫印跡化學(xué)發(fā)光試劑后，Luminol發(fā)生氧化降解，并發(fā)射波長(cháng)為428nm的光，此光可經(jīng)X光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來(lái)。更多相關(guān)知識,可以與本公司.